以FAK为靶点的RNA干扰的黑色素瘤基因治疗

 RNA 干扰（RNA interference, RNAi）是由双链RNA 介导的序列特异性的转录后基因沉默现象。它通过识别与之序列相同的mRNA 来使特定基因在转录后水平被降解。RNAi 技术具有高的基因沉默效率和特异性, 为基因治疗等研究领域提供了一个新的研究手段。黏着斑激酶（FAK）是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶，参与调控细胞的运动和增殖等生命功能。FAK 在肿瘤的生成和恶化过程中起重要作用，在多种肿瘤细胞系中均观察到了FAK 的高表达现象，这表明了FAK 可能是一种潜在的肿瘤治疗的靶点。许多研究小组报道了在体外多种细胞系转染FAK 反义RNA 或 RNAi 的研究，观察到FAK 反义RNA 或 RNAi能有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。然而至今还没有关于在体内的肿瘤中，进行以FAK 为靶点的治疗研究。由于体内生理的复杂性，体外的结果并不能代替体内的现象，为此有必要开展体内研究，为临床治疗提供必要的基础。因而，我们构建了以FAK 为靶向的RNAi 表达质粒。首先，在体外采用GenEscort™ Ⅲ试剂转染该质粒能有效抑制了B16F10 细胞中的FAK水平。同时，我们还转染了FAK的显性负作用的变体FRNK,在体外FAK 的基因沉默和FRNK 都能显著的抑制B16F10 肿瘤细胞的增殖和迁移。然后在体内实验中，我们采用了原位生长肿瘤模型和足掌主动转移模型来评价FAK 作为肿瘤治疗靶点的效果。结果显示在体内模型中，与对照组相比，两种方法都可以明显抑制原位肿瘤的生长，并阻止B16F10 细胞向引流淋巴结转移，充分说明FAK 在黑色素瘤中可以做为肿瘤治疗靶点，能够有效阻止和抑制肿瘤的主动转移，这一结果将为临床肿瘤的治疗提供新的策略。

 

      本实验的GenEscort™ Ⅲ基因转染试剂发挥了重要的工具作用，这种非病毒载体相对于病毒载体有许多优点，因而被广泛使用，近年来对 PEI 的改性，已成为研究的热点，以便使其有更好的转染效率和更小的毒性。GenEscort™ Ⅲ是一种多用途的转染试剂，该试剂由可生物降解的超高分枝的PEI衍生物与其它组分复合而成。对各种贴壁细胞有较高的转染效率、也适用于转染悬浮细胞和原代细胞。可用于转染大分子DNA、小分子寡核苷酸和siRNA等。特别适用于携带质粒或DNA、RNA片段用于注射小鼠的静脉、皮下和腹腔等部位进行体内动物实验。